《生化危机5》主要讲述了 爱丽丝与救援小队合力从伞公司的海底设施逃出，并与威斯克汇合，准备进行最终决战的故事。艾丽丝（米拉·乔沃维奇饰）在“保护伞”公司最机密的运作中心醒来，随着她深入挖掘谜团的核心部分，她的过去也逐渐被揭露。她发现自己在实验中与T病毒结合获得了超能力，但由于前作中被威斯克注射了中和血清，所以在这一部中她失去了这些能力。在与伞公司攻击部队的枪战中失去意识后，她被囚禁在海底设施中。
艾丽丝必须与新的战友和以前熟悉的老朋友一起，在残酷的环境中生存并寻找真相。她的旅程从东京追击到纽约，再从华盛顿辗转到莫斯科，最终带来了令人震惊的启示，迫使她重新思考自己曾经认为确凿的事实。在逃亡和寻找真相的过程中，她发现了一个更大的阴谋，涉及“保护伞”公司的秘密和T病毒的起源。
最终，爱丽丝与威斯克汇合，准备进行一场决定地球命运的最终决战。
